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  常规的Tris-SDS-PAGE电泳的只能分辨大分子蛋白，对于相对分子量小的，尤其是10 kD以下的蛋白分辨率极低。而Tricine-SDS-PAGE可以很好的分离分子量在1-10 kD的蛋白及多肽，成为目前电泳法变性分离多肽的主要方法。本产品包括Tricine-SDS-PAGE凝胶制备所需全套试剂，只需自备蒸馏水，即可制备高质量各种浓度的凝胶，方便、快捷，电泳后可直接用于考染、银染、Western杂交等实验。

试剂盒组成：

组份	50次
49.5%T 3%C	30ml
49.5%T 6%C	100ml
Tricine-SDS-PAGE Gel Buffer	140ml
Glycerol	30ml
APS	0.5 g
TEMED	750μl

本产品所提供的APS(过硫酸铵)为固体粉末，使用前加入纯水溶解即配制成10%APS溶液(0.5 g APS加5ml纯水)，将溶液分装后置于-20℃保存，通常半年内有效。溶液在使用中可放置4℃保存两周。

注意事项：
1、本产品所提供的APS(过硫酸铵)为固体粉末，使用前加入纯水溶解即配制成10%APS溶液(0.5 g APS加5ml纯水)，10%APS配制后分装-20度保存。APS溶液不稳定，应尽量减少室温存放时间，每次取用后立即放回冰箱，以防失效；若发现凝胶聚合时间延长，应考虑更换，使用-20℃保存的10%APS。
2、在凝胶配制过程中，尤其是液体混匀步骤，应尽量避免气泡的产生。
3、在分离胶上层加纯水时要小心操作，加水时速度不能太快。
4、丙烯酰胺具有神经毒性，操作时请穿着实验服并佩戴一次性手套。
5、本产品仅用于科研，不能用于人体实验或人体治疗。

操作步骤：

根据目的蛋白分子量大小选择合适的PAGE分离胶配制浓度，凝胶浓度配方参考附表。

I 配制分离胶
1、将不同体积的纯水、49.5%T 6%C、Tricine-SDS-PAGE Gel Buffer和Glycerol(甘油)加入到离心管中混合。
2、加入10%APS和TEMED，立即涡旋混匀5-10秒，以使溶液充分混匀。
3、在凝胶模具中迅速灌入适量分离胶溶液(对于1 mm mini-gel，分离胶溶液加约4ml)，然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-3 cm的水层，使凝胶表面保持平整。
4、静置，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。

II 配制夹层胶
去除覆盖在分离胶上的水层，用滤纸将残留的水尽量吸去。
1、将不同体积的纯水、49.5%T 3%C和Tricine-SDS-PAGE Gel Buffer加入到离心管中混合。
2、加入10%APS和TEMED，立即涡旋混匀5-10秒，以使溶液充分混匀。
3、将适量的夹层胶溶液迅速加至分离胶的上面(对于1 mm的mini-gel，夹层胶溶液加约1ml)， 然后在夹层胶溶液上轻轻覆盖一层水层，使凝胶表面保持平整。
4、静置，待夹层胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。

附表Tricine-SDS-PAGE凝胶配方表：

组份	分离胶(胶浓度/配制体积)			夹层胶 (胶浓度/配制体积)	浓缩胶 (胶浓度/配制体积)
	20%/4.5ml	16.5%/4.5ml	15.5%/4.5ml	10%/2ml	4%/2ml
49.5%T 3%C	-	-	-	0.407ml	0.16ml
49.5%T 6%C	1.82ml	1.5ml	1.395ml	-	-
凝胶缓冲液	1.5ml	1.5ml	1.5ml	0.667ml	0.496ml
甘油	0.48ml	0.48ml	0.48ml	-	-
ddH2O	0.7ml	1.02ml	1.125ml	0.926ml	1.344ml
10% AP	40μl	40μl	40μl	20μl	20μl
TEMED	5μl	5μl	5μl	3μl	3μl

III 配制浓缩胶
去除覆盖在夹层胶上的水层，用滤纸将残留的水吸去。
1、将不同体积的纯水、49.5%T 3%C和Tricine-SDS-PAGE Gel Buffer加入到离心管中混合。
2、加入10%APS和TEMED，立即涡旋混匀5-10秒，以使溶液充分混匀。
3、将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
4、待凝胶聚合后，小心地拔出梳子，以免破坏加样孔。
5、进行电泳操作。

IV 电泳
将电泳槽放入4℃或冰水浴中，外槽加入阳极缓冲液，内槽加入阴极缓冲液，30V预电泳10 min，将样品(已经过Tricine专用上样缓冲液处理)加入点样孔后30V电泳1小时，100V电泳至溴酚蓝到达胶底部后停止电泳，进行后续的考马斯亮蓝染色或电转。

储存条件：2～8℃
相关搜索：Tricine-SDS-PAGE凝胶制备试剂盒，Tricine-SDS-PAGE Gel Kit